α-淀粉酶测定试剂盒
产品名称: α-淀粉酶测定试剂盒
英文名称: α-amylase Assay Kit
产品编号: BC0610
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-11-22T10:39
使用范围: null
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α-淀粉酶测定试剂盒产品内容:
试剂一:液体40mL×1瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入20mL蒸馏水,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;
标准品:粉剂×1支,10mg无水葡萄糖。
产品说明:
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二**水杨酸生成棕红色物质,在540 nm有吸收峰;通过测定540 nm吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min,就只有α-AL能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
α-淀粉酶测定试剂盒操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g样本,加0.8mL蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min,每隔5min振荡1次,使其充分提取;6000g,常温离心10min,吸取上清液并加蒸馏水定容至10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
二、测定步骤和加样表:
1、 分光光度计或者酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm。
2、 将葡萄糖用蒸馏水稀释为0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和0.0039 mg/mL的标准溶液。
3、 按操作表依次加入各试剂:
试剂(μL) | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
α淀粉酶原液 | 250 | 250 | - | - | |
蒸馏水 | - | - | - | 250 | |
标准溶液(mg/mL) | - | - | 250 | - | |
70℃水浴15min左右,冷却 | |||||
试剂一 | 500 | - | - | - | |
将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右 | |||||
试剂二 | 250 | 250 | 250 | 250 | |
在40℃恒温水浴中准确保温5min | |||||
试剂一 | - | 500 | 500 | 500 |
混匀,90℃水浴10min,蒸馏水调零,540nm处读取对照管、测定管、标准管、空白管吸光度,分别记为A对照、A测定、ATUNEology 波长可调检测卡盒-->