DTNB介绍及应用(DTNB Ellman’s Reagent)

产品描述：

DTNB为Ellman试剂。它用于比色法测定生物样品中巯基。它易溶于水。在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄  色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。   

配置方法：

准确称取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用。应该注意的是配置缓冲、浓度，储存时要避免见光。      

应用举例：

      半胱氨酸中自由巯基的定量检测方法
        一、试剂的配制：

1、Tris－HCL缓冲液（0.25M）：DDW准确配制后，用盐酸调节pH＝8.3；

2、半胱氨酸标准溶液（1mM）：准确称取0.017563gL－半胱氨酸（175.63），用1ml甲酸溶解，以DDW定容至100ml；

3、DTNB（分子量：396.35）标准溶液（10mM）：准确称取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用：

4、DTNB分析溶液（0.1mM）：由1体积10mMDTNB标准液加99体积0.25M的Tris缓冲液配制而成，现用现配。

二、标准曲线的制作;

1、25℃条件下，用Tris缓冲液稀释半胱氨酸标准液配成梯度的稀释液（5.0ml），其浓度分别为：0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM；

2、取上述各浓度溶液1ml分别加入到5ml预先恒温于25℃水中的DTNB分析溶液，摇匀，准确静止10min，立即于波长412nm处测定吸光度值（A）。根据目的蛋白的吸光度在标准曲线上读出对应的浓度即可

前尘公司提供的DTNB相关参数：

Product Name:DTNB

Product Number:D8130

Product Brand:Sigma

CAS Number:69-78-3

Molecular Formula:[-SC6H3(NO2)CO2H]2

Molecular Weight:396.35

APPEARANCE:YELLOW POWDER

SOLUBILITY:CLEAR YELLOW TO YELLOW-GREEN SOLUTION

AT 40MG PLUS 5ML OF ETHANOL

IR SPECTRUM:CONSISTENT WITH STRUCTURE

PURITY BY THIN LAYER CHROMATOGRAPHY:NLT 98%

SUITABILITY:SUITABLE FOR USE AS A REAGENT IN SULFHYDRYL

GROUP DETERMINATION

RECOMMENDED RETEST:5 YEARS

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